Лабораторные тесты для идентификации эмбриональных стволовых клеток

Лабораторные тесты для идентификации эмбриональных стволовых клеток

На различных этапах процесса формирования зародышевых линий стволовых клеток иссле­дователи проверяют характерные свойства клеток.

До сих пор нет единого мнения по стандартному набору тестов, с помощью которых можно проверить фундаментальные свойства стволовых клеток. Полагают, что многие из эффектов, которые используются, не могут быть надежными индикаторами важных физиологических свойств и функций клеток. Наиболее часто в лабораториях, зани­мающихся зародышевыми клетками, используют такие тесты:

1. Стволовые клетки культивируют и субкультивируют в течение многих месяцев. Это гарантирует способность клеток к продолжительному самообновлению. Обычно исследователи рассматривают культуры под микроскопом, чтобы оценить состояние клеток и убедиться в том, что они остаются недифференцированными.

2. Определяется наличие поверхностных маркеров, которые характерны только для недифференцированных клеток. Еще одной пробой является определение белка Okt4, обычно продуцируемого недифференцированными клетками. Okt4 — фактор транскрипции, регулирующий активность генов, участвующих в дифференцировке клетки и, соответственно, развитии зародыша.

3. Путем микроскопии изучаются хромосомы для выявления повреждения и изменения их количества.

4. Определяется способность клеток к субкультивированию после замораживания/размораживания и пересадки.

5. Зародышевые стволовые клетки человека проверяются на плюрипотентность путем: — предоставления возможности стволовым клеткам спонтанно дифференцироваться в клеточ­ной культуре;

6. Управления процессом дифференцировки таким образом, чтобы стволовые клетки могли дифференцироваться в определенные типы клеток; — введения стволовых клеток мышам, у которых подавлен иммунитет, для проверки образо­вания тератомы; тератомы обычно содержат смесь ряда дифференцированных или частично дифференцированных групп клеток, что является признаком потенци­альной возможности эмбриональных стволовых клеток к дифференцировке в клетки разного типа.

Следует отметить, что пока эмбриональные стволовые клетки растут в культуре при определенных услови­ях, то они остаются недифференцированными. Но если дать им возможность со­единиться, они формируют эмбриоидные тела и начинают спонтанно дифферен­цироваться, образуя группы клеток (мышечных, нервных и др.).

Самопроизволь­ная дифференциация — хороший признак того, что культура стволовых клеток является здоро­вой, но это не очень эффективный способ производства культуры определенных типов клеток. Для получения культуры определенных типов дифференцирован­ных клеток, например, клеток сердечной мышцы, нервных клеток, разрабатывают­ся методы направленной дифференцировки эмбриональных стволовых клеток. Для этой цели изменяют состав питательной среды, поверхность культуральной чашки, «вставляют» в клетки оп­ределенные гены, изменяя эти клетки. В итоге многолетних исследований удалось составить «рецепты» для направленной дифференцировки стволовых клеток в некоторые специ­ализированные типы клеток.

Если будут разработаны надежные методы направленной дифференцировки стволовых клеток в определенные типы клеток, то в ближайшем будущем возможно лечение неко­торых тяжелых болезней, таких как болезнь Паркинсона, диабет, травматическое повреждение спинного мозга, дегенерация клеток Пуркинье, мышечная дистрофия Дюшена, инфаркт миокарда и другие.


Карта сайта


Информационный сайт Webavtocat.ru